泌外在线 | TAZ蛋白在膀胱癌组织中的表达及调控膀胱癌细胞株T24、UMUC-3增殖能力的研究

     膀胱癌是威胁人类尤其是男性生命健康最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在所有男性恶性肿瘤中位居第4位^[1]。膀胱癌的治疗以手术治疗为主，辅以术后的化疗。新发的膀胱肿瘤诊断多数以浅表性肿瘤（临床分期Ta，T1，或Tis）为主，然而在接受经尿道膀胱肿瘤电切术及术后规律的化疗灌注后，仍有约 54% 的患者会多次复发，其中10%的患者会发展成肌层浸润性膀胱癌。高达22%的进展率是目前膀胱癌治疗的主要挑战。TAZ蛋白是 HiPPo 信号通路下游最主要的效应蛋白之一^[2]。HiPPo 信号通路，又被称为 MST1/2-WW45- LATS1/2 信号通路，是生物体内高度保守，并与细胞的增殖、组织的分化及器官生长密切相关的信号通路 。而 YAP1 和 TAZ 蛋白是该调控通路下游发挥作用的主要效应器，参与了细胞内的信号转导和下游的转录靶基因的转录共激活因子，进而调控细胞的增殖、凋亡等过程。

     既往的研究证实了在肝细胞癌、直肠癌、胃癌、喉癌等多种人类恶性肿瘤中，TAZ蛋白与肿瘤的发生发展及增殖、转移等生物学特征密切相关。本研究探讨 TAZ 蛋白与膀胱癌临床标本病理分级及临床分期的关系，并进一步通过体外细胞实验探讨其调控膀胱癌细胞株体外增殖的机制。现报道如下。

【目的】

     探讨TAZ蛋白的表达与膀胱癌临床分期及病理分级的关系，进一步研究 TAZ 蛋白在膀胱肿瘤细胞增殖中的作用。

【方法】

     应用免疫组化方法检测 25 例膀胱癌组织及 5 例正常膀胱粘膜组织中TAZ蛋白的表达；利用荧光实时定量PCR 方法（qRT-PCR）检测 10 对新鲜膀胱癌组织及癌旁对照组织中TAZ mRNA的表达情况；应用siRNA 技术干扰膀胱癌细胞株T24及UMUC-3 中TAZ蛋白的表达，qRT-PCR 法检测干扰效果，然后采用MTT比色实验检测膀胱癌细胞生长曲线。

【结果】

     在膀胱移行上皮癌组织中，TAZ mRNA 和蛋白的表达均较癌旁黏膜升高，通过 siRNA干扰TAZ 蛋白基因的表达，可以明显抑制膀胱癌细胞（T24、UMUC-3）的体外增殖能力。

【结论】

     TAZ蛋白在膀胱癌组织中高表达，且表达水平与膀胱癌的临床分期及病理分级有关，过表达的TAZ蛋白促进了膀胱癌细胞株的体外增殖能力。本实验通过检测 10 对新鲜膀胱癌及癌旁对照组织及 25 例膀胱癌石蜡标本，证实了 HiPPo 信号通路重要的效应基因TAZ蛋白在膀胱癌组织中高表达，且与肿瘤的病理分级正相关。

     同时，在细胞实验中，初步证实了 TAZ蛋白能够促进 T24 及 UMUC-3 两株膀胱癌细胞的体外增殖能力。HiPPo 信号通路是一条调控细胞及组织生长、分化的十分保守的信号通路。最初，因为其中因子的突变往往导致果蝇组织器官的惊人的生长，而引起了人们对其致癌性的猜测。HiPPo 信号通路包含着一个巨大的蛋白网络，至少有 35 种蛋白在果蝇或者人类的细胞的生长、分化中发挥着重要作用。其核心部分则包含着一系列激酶，如 STE20 蛋白激酶 1 (MST1)、肿瘤抑制蛋白 1（LATS1）、 SAV1 等。

     既往有学者发现 HiPPo 信号通路调控果蝇细胞增殖与凋亡的核心分子式Yki 蛋白，即人体中的 TAZ 蛋白及其共同协同蛋白YAP1，二者共同组成了HiPPo信号通路在哺乳动物中的效应器，并通过影响 TEADs 和SMADs 两个转录因子的表达进而影响下游基因网络的表达变化，从而促进组织的生长和细胞的活力^[3]。

     既往的研究已经证实 TAZ 与包括肝细胞癌、直肠癌、胃癌、喉癌在内的多种人类恶性肿瘤的发生、发展密切相关。如在胃癌中，TAZ 蛋白在癌组织中的表达明显上调，且同时通过与TEAD 的相互作用促进了胃癌细胞的增殖。在结直肠癌中，Wnt/  -catenin 信号通路的激活依赖于 TAZ 的表达水平 。HiPPo 信号通路在膀胱癌的发生、发展也起着重要的作用。HiPPo 通路的上游基因MST1/2 和 LATS1 被证实在膀胱癌中发挥了抑癌基因的作用。而 TAZ 的共激活因子 YAP1 被发现与膀胱癌的临床分期、病理分级及其预后密切相关，可以作为判断膀胱癌预后的分子标志物之一 。既往的研究也发现了YAP1 能够促进膀胱癌细胞的增殖及转移能力 。作为 YAP1 蛋白最重要的协同因子，我们认为 TAZ 在膀胱肿瘤的恶性进展中也发挥了重要的作用。

     通过临床组织样本实验，证实了膀胱癌癌组织中的TAZ 表达量显著高于癌旁黏膜组织，从已有的 25 例病例标本的信息汇总来看，随着膀胱癌恶性程度的升高，TAZ 的表达量有所上调。同时，通过细胞体外实验，MTT 实验证实了TAZ 基因能够调控膀胱癌细胞株（T24、UMUC-3）的体外增殖能力。利用 siRNA 沉默技术，笔者进一步证实了TAZ 对膀胱癌细胞株的增殖能力也存在着正向调控作用。

     综上所述，与 HiPPo 信号通路的其他基因一样，TAZ 在膀胱癌的恶性发展也起着重要作用。希望随着研究的深入， 能进一步明确 TAZ 是否可以作为膀胱癌病例预后判断的标志分子，且深入揭示其调控包括膀胱癌细胞增殖在内的诸如恶性转移、化疗耐药性等方面的机制。

【参考文献】

    [1] Miller KD, Siegel RL, Lin CC, et al. Can- cer treatment and survivorship statistics, 2016[J]. Ca A Cancer Journal for Clinici- ans,2016,66(4):271.

    [2] Hall MC, Chang SS, Dalbagni G, et al. Guideline for the management of nonmu- scle invasive bladder cancer (stages Ta, T1, and Tis): 2007 update[J]. Journal of Urology,2007,178(6):2314-2330.

   [3] Hong W, Guan KL. The YAP and TAZ transcription co-activators: key downstream effectors of the mammalian HiPPo path - way[J]. Seminars in Cell & Developmen- tal Biology,2012,23(7):785.