达健生物人Twist1基因甲基化检测试剂盒获批——助力膀胱癌临床诊疗路径创新

膀胱癌概述

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，占我国泌尿系肿瘤的首位，据国家癌症中心2022年2月发布的最新全国癌症统计数据2016年我国膀胱癌发病率为5.95/10万，死亡率为2.44/10万，且随着经济发展其发病率和复发率呈逐年增加的趋势。膀胱癌的发病在男性中多于女性，长期吸烟、在化工厂中工作的人群发病风险显著增加。

无痛性血尿是罹患膀胱癌的一大典型症状，除此之外尿频、尿急、尿痛等其他尿路刺激征也可能预示着膀胱病变的存在。此外有文献指出非肌层浸润性膀胱癌患者的单纯经TURBt术后1年复发率为45%，因此，对于选择保膀胱方案的术后患者通常需每年进行3～4次膀胱镜检查，监测有无复发。

诊疗现状——传统检测手段成熟但早期检出率低，复发监测依从性差

图示 膀胱癌诊疗路径及实现方法

临床上常见使用影像学或尿脱落细胞学进行膀胱癌的早期筛查，但这些方法对于早期、细小、隐蔽、原位肿瘤敏感性低，此外临床上膀胱癌患者的发现，多是因为伴有无痛性血尿，或伴有尿频尿急尿痛等，经由体检或因其他疾病例行检查时发现，这就导致早期发现膀胱癌的比例不高。

膀胱癌的确诊依赖于膀胱镜检及活检，该方法也是术后复发监测的主要手段之一。膀胱镜检分为普通硬性膀胱镜及软性膀胱镜检，指南推荐常规行麻醉无痛膀胱镜检查，因为该方法为侵入性检查手段，具有一定损伤性，患者依从性差，频繁的镜检可能会引起泌尿男性生殖系统感染，尿道形成瘢痕组织，尿道口狭窄等并发症，最终可能导致无法继续做膀胱镜检。

早期膀胱癌患者如果能得到及时诊断，可以增加手术保留膀胱的机会，提高患者生活质量和总体生存率，在术后复发监测的应用场景上，如果可以频繁无创采样，即可提高患者随访依从性，减轻患者的生理、心理痛苦。

膀胱癌基因甲基化检测首证获证 助力诊疗路径革新

2022年10月08日，广州达健生物科技有限公司（以下简称：达健生物）申报的“人Twist1基因甲基化检测试剂盒（荧光PCR法）”成功取得国家药品监督管理局（NMPA）批准上市（注册证号：国械注准20223401301），这是NMPA批准的基因甲基化检测技术用于膀胱癌辅助诊断的全国第一证。

（国家药品监督管理局获批公告）

膀胱癌基因甲基化产品在优化诊疗路径上的价值

基于上述临床诊疗痛点，与目前临床常见诊疗方法相比，达健生物自主研发的“人Twist1基因甲基化检测试剂盒（荧光PCR法）”存在以下优势：

1、基因层面检测，将提前发现肿瘤的机会大大提高：达健生物人Twist1基因甲基化检测试剂盒（荧光PCR法），通过检测尿液中人脱落细胞Twist1基因甲基化状态，可在肿瘤发生的早期就能检出，对0a期及I期膀胱癌的检测灵敏度分别达到了81.29%及94.19%，明显优于尿脱落细胞学及FISH检测等方法的数据。

注册临床数据显示，产品在0a期及I期即有高灵敏性

另外，试剂在低级别或非浸润期膀胱癌患者样本中亦体现高灵敏性。

2、与膀胱镜检符合率高，减少有创检测频次，提高患者对于检测的依从性：

注册临床试验数据显示，对1178例有效病例进行分析：在348例膀胱癌患者中，试验试剂检测阳性者307例，阴性者41例，灵敏度为88.22%（307/348）；在830例干扰组和对照组中，试验试剂检测阳性者89例，阴性者741例，特异度为89.28%（741/830），试验试剂的总符合率为88.96%。

通过数据可以看出，试剂盒在检测性能上，与目前膀胱癌金标准膀胱镜检+组织活检的总符合率达到88.96%。而膀胱镜检由于是侵入性检测，给患者带来极大的痛苦，导致患者的检测依从性非常差，不利于临床早期确诊以及术后高频率随访以监测复发。

膀胱癌基因甲基化检测就能有效弥补这一“漏洞”。产品只需采集80ml尿液样本即可对膀胱癌特异性Twist1基因状态进行检测，判断患者的膀胱癌发生风险。因此，达健生物的人Twist1基因甲基化检测试剂盒，可以在当前诊疗路径中针对有症状患者的确诊和鉴别诊断，对检测阴性的患者，综合其他的诊断结果后，判断膀胱癌发病风险低，可考虑暂不需进行有创的膀胱镜检。对检验结果阳性的患者，考虑膀胱癌发病风险较高，才对患者进行进一步的膀胱镜检。另外，在术后患者随访中，亦同样适用。通过3个月、6个月、12个月一次的随访，在先结合膀胱癌Twist1基因甲基化检测和目前其他现有随访手段的结果初步判断其复发风险高低，再确定是否需要进行进一步的膀胱镜检，在保证术后随访频次监测复发的基础上，能有效降低有创检测的次数，提高患者依从性。

3、增加其他上尿路肿瘤的发现机会：该产品对高同源性的上尿路肿瘤（肾盂癌和输尿管癌）也有较高的检出率，能增加上尿路肿瘤的临床发现机会。

数据显示，在输尿管癌病例中，试验试剂检测结果与测序结果对比的阳性符合率为100.00%(8/8)，阴性符合率为100.00%(5/5)，总符合率为100.00%(13/13)；在肾盂癌病例中，试验试剂检测结果与测序结果对比的阳性符合率为100.00%(6/6)，阴性符合率为100.00%(1/1)，总符合率为100.00%(7/7)。

指南明确DNA甲基化检测在膀胱癌诊断方面的价值与优势

中华医学会泌尿外科分会（CUA）、中国医师协会泌尿外科医师分会（CUDA）、中国抗癌协会泌尿男生殖系肿瘤专业委员会（CACA-GU）在2021年发布的《中国膀胱癌诊断治疗指南》和《中国泌尿外科和男科疾病诊断治疗指南（2019版）》指出：DNA甲基化作为肿瘤表观遗传学修饰最为常见的方式，其检测在肿瘤分子诊断中具有重要前景。已有报道通过PCR技术对尿液中膀胱癌特定的DNA甲基化位点进行检测，在低级别和非肌层浸润性膀胱癌的敏感性明显优于尿脱落细胞学和FISH，展示良好的诊断结果，有望实现临床转化；尤其在早期、微小、残留和复发肿瘤诊断上具有显著优势，有望用于膀胱癌早期诊断、复发监测，为减少有创的膀胱镜检查和为二次电切手术提供科学依据。

此次“人Twist1基因甲基化检测试剂盒（荧光PCR法）”获批膀胱癌甲基化检测第一证，是我国膀胱癌临床诊疗上又一具有标志性意义的事件，其将成为继膀胱镜检查、活组织检查及尿细胞学检查之后的又一个突破性检验手段，为膀胱癌临床精准诊疗提供了又一新兴利器。

来自临床医生对尿液甲基化测定的几点认识

泌尿外科医生学习联盟参加讨论专家

周鹏 杭州市第三人民医院

张培新 新疆自治区人民医院

王欣 泌尿外科医生学习联盟

近年来，陆续接触了尿液甲基化测定，对于其适应症以及检测流程有了初步了解，同时也做了些检测，体会总结如下：

1、我国2019版泌尿外科和男科疾病诊断治疗指南上第40页记述：DNA甲基化作为肿瘤表观遗传学修饰最为常见的方式，其检测在肿瘤分子诊断中具有重要前景。 已有报道通过PCR或者飞行时间质谱方法对尿液中膀胱癌特定的DNA甲基化位点进行检测，在低级别和非肌层浸润性膀胱癌的敏感性明显优于脱落细胞学和FISH，有望实现了临床转化。

其引用的两篇文献^[1.2]均是中国人的文献。目前是否存在人种的差异，汉民族膀胱癌的尿液的甲基化修饰程度会显著高于其他种族尚不得而知。具体转化的成果就是目前市面上可见的各类产品，也期待在中国人群中更多高分值文章能够发表。

2、今年3月更新过的2022年EAU Non-Muscle-Invasive Bladder Cancer (Tat1 And Cis)的指南，秉承其一贯的严谨科学态度。对于尿液标记物的现象的解读：受困于传统的尿细胞学的低敏感性的驱使，目前有很多种尿液标志物被开发出来，但是目前尚无任何一种被任一临床指南接受并作为临床诊断和随诊常规操作的^[3.4]。

其中与甲基化相关的文献是第113和120篇:

现在可以认为作为行业风向标-EAU对于尿液标记物检测的态度是开放的，不否认此类检测的高敏感性对于临床的帮助，但在进一步的RCT研究数据披露以前，仍需谨慎的对待。

3、对于实际操作上的一点建议：我国的2019版泌尿外科和男科疾病诊断治疗指南和EAU指南均指出，晨尿因其细胞溶解比率高，不适合做细胞学检查，推荐连续三天进行尿细胞离心并固定，并合并三天的尿细胞进行诊断。但是虽然甲基化检测推荐用随机尿，但仍更多推荐晨尿，但如若3次检测患者的经济负担将会极大的增加。

参考文献：

[1] Wang Y, et al. An epigenetic biomarker combination of PCDHl 7 and POU4F2 detects bladder cancer accurately by methylation analyses of urine sediment DNA in Han Chinese. Oncotarget, 2016, 7 (3): 2754-2764. *

[2] Chen X, et al. TOF-MS based urine DNA methylation classifier: A fast and effective technique for non-invasive diagnosis and monitoring of bladder cancer. Eur Urol Suppl, 2019, 18(1) :e307.*

[3]Roupret, M., et al. A comparison of the performance of microsatellite and methylation urine analysis for predicting the recurrence of urothelial cell carcinoma, and definition of a set of markers by Bayesian network analysis.BJU Int,2008.101:1448. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18325051/

[4]D’Andrea, D., et al. Diagnostic accuracy, clinical utility and influence on decision-making of a methylation urine biomarker test in the surveillance of non-muscle-invasive bladder cancer. BJU Int, 2019. 123: 959.

编辑：邓晓君

审核：王欣

终审：郭涛