揭秘膀胱癌化疗新靶点！CAB39蛋白激活LKB1-AMPK-LC3信号通路，助力克服顺铂耐药

以顺铂为基础的综合化疗方案是膀胱癌一线方案，但化疗耐药问题极大地限制了患者的远期生存。近日，兰州大学第二医院的王志平教授团队的郜栋阳博士在《Free Radical Biology and Medicine》（一区IF 8.1）上报道了CAB39蛋白通过LKB1-AMPK-LC3信号通路对膀胱癌顺铂耐药的促进作用。旨在破解膀胱癌顺铂耐药机制，为顺铂化疗的联合药物开发提供新切入点。

2、通过DIA蛋白质谱技术分析显示T24r与T24相比有136个蛋白显著上调；在顺铂冲击后，T24r与T24相比有132个蛋白显著上调，对两组上调蛋白求交集得到35个蛋白，主要富集在线粒体、氧化还原代谢、AMPK信号通路、Hippo通路等。

3、从顺铂耐药细胞表达上调的35个蛋白中筛选出11个进一步鉴定发现只有CAB39敲低亚系T24rCAB39-k1和T24rCAB39-k2对顺铂（CDDP）的敏感性明显高于对照组。过表达CAB39的细胞株对顺铂的敏感性明显低于对照细胞株，CAB39表达增加可显著降低顺铂冲击后膀胱癌细胞中的ROS水平。

4、在耐药细胞中进一步敲减了CAB39的下游基因，发现只有在敲减LKB1后，膀胱癌细胞对顺铂的敏感性明显增高；LKB1的敲低也增加了膀胱癌细胞中的ROS水平。表明CAB39可能通过LKB1-AMPK通路促进膀胱癌顺铂耐药。LKB1-AMPK通路在细胞代谢、自噬和线粒体稳态调节中发挥重要作用，而线粒体又对细胞内ROS水平有重要影响。

进一步检测耐药细胞线粒体健康状态以及细胞自噬水平的变化发现在顺铂冲击之后，耐药细胞较亲代细胞有更高的自噬通量和更健康的线粒体状态。在耐药细胞中LKB1-AMPK-LC3通路激活程度显著高于亲代。顺铂冲击后，耐药细胞中的线粒体自噬水平明显高于亲代细胞。自噬抑制剂磷酸氯喹可显著增强顺铂对膀胱癌细胞的杀伤作用。

5、在耐药系中敲减CAB39后，自噬通路AMPK-ULK1-LC3激活程度明显减弱；在亲代细胞中过表达CAB39后，自噬通路AMPK-ULK1-LC3激活程度明显增强。在耐药细胞中敲减自噬关键基因ULK1后发现，膀胱癌细胞对顺铂的敏感性显著增加。CAB39对膀胱癌细胞顺铂冲击后的自噬水平有明显促进作用，且这种自噬作用可能对膀胱顺铂耐药以及顺铂冲击后线粒体健康状态的维持至关重要。

6、动物实验表明自噬抑制剂磷酸氯喹可显著增加膀胱癌顺铂耐药细胞UMUC3r对顺铂+吉西他滨(GC)化疗的敏感性。